本研究聚焦于由横纹肌溶解症引起的急性肾损伤（AKI），深入探讨了巨噬细胞外陷阱（METs）在此过程中的重要作用。研究首次揭示了血小板激活诱导巨噬细胞释放METs，从而加剧AKI的全新机制，并发现了针对该路径的潜在治疗手段，为横纹肌溶解症引发的AKI治疗提供了创新思路。

肌溶解是一种由骨骼肌损伤引起的严重综合征，致使受损肌细胞的分解产物进入全身循环。此类肌损伤通常源于剧烈运动、肌肉缺氧、药物或药物滥用，可能导致危及生命的并发症，如急性肾损伤（AKI）。肌溶解及其AKI并发症可见于压榨综合征，该综合征常见于自然灾害（如地震）和人为灾害（如战争和恐怖袭击）后。受损肌肉释放的肌红蛋白被认为会引发此类AKI的肾功能障碍。目前，虽然有研究将巨噬细胞与肌溶解引起的AKI的病理紧密关联，但确切的分子机制仍待探讨。

在本研究中，我们展示了在肌溶解小鼠模型中，巨噬细胞释放由DNA纤维和颗粒蛋白组成的细胞外陷阱（ETs）。肌溶解过程中，坏死肌细胞释放的血红蛋白激活血小板，显著增强了巨噬细胞METs的产生，主要通过提升细胞内活性氧（ROS）生成及组蛋白去精氨酸化。我们首次报告了METs及血小板在肌溶解引起的AKI中作为肌红蛋白衍生血红蛋白感应器的意外作用，这一发现为该疾病的治疗提供了新的靶点。

研究方法

1. 动物模型构建

研究者采用小鼠模型模拟横纹肌溶解症，通过向小鼠肌肉内注射甘油以观察肾脏损伤情况。同时，利用基因敲除技术培育特定基因缺失小鼠，如PAD4基因敲除（Padi4−/−）小鼠，并通过药物（如CLA）干预特定信号通路，以评估METs在病理过程中的作用。

2. 细胞类型耗竭实验

为研究巨噬细胞、中性粒细胞及血小板在横纹肌溶解症引发AKI中的具体贡献，研究者采用特定方法耗竭这些细胞。例如，使用克隆霉素脂质体耗竭巨噬细胞，利用抗Ly6G抗体耗竭中性粒细胞，以及使用抗GPIbα抗体耗竭血小板。通过比较处理组小鼠在模型诱导后的肾脏损伤指标，确认各细胞类型在病理过程中的作用。

3. 免疫组化与免疫荧光染色

研究者通过免疫组化及免疫荧光技术对小鼠肾脏组织进行染色，以探测METs的存在与分布。使用针对CitH3、F4/80等的特异性标记抗体，结合荧光显微镜进行观察，分析METs在肾脏中的具体位置及其与肾脏损伤区域的关联。

4. 体外细胞实验

研究者体外培养THP-1单核细胞系，通过刺激其分化为巨噬细胞，模拟体内血小板激活及METs形成的过程。通过预处理巨噬细胞（如使用DNaseI、DPI、CLA等），观察不同干预下METs的形成情况，探究血小板激活、ROS生成及PADs活性对METs形成的影响。

研究结果

1. METs在横纹肌溶解症引发AKI中的作用

研究发现，METs以无定形DNA结构形式存在于横纹肌溶解症模型小鼠的肾脏中，并与citrullinated histone H3（CitH3）共定位，尤其集中在肾小管。与野生型（WT）小鼠相比，PAD4基因敲除（Padi4−/−）小鼠及经PAD抑制剂CLA处理的小鼠，其血清肌酐（Cr）、血尿素氮（BUN）等AKI指标显著降低，肾脏损伤程度减轻，表明METs在横纹肌溶解症引发的AKI中具有关键作用。

2. 巨噬细胞与血小板的协同作用

研究表明，耗竭巨噬细胞或血小板均明显减轻横纹肌溶解症引发的肾脏损伤，而耗竭中性粒细胞则未见此效果。免疫荧光染色结果显示，CitH3仅与巨噬细胞标记F4/80共定位，而不与中性粒细胞标记Ly6G共定位。同时，研究发现血小板激活后会结合巨噬细胞上的Mac-1受体，促发ROS生成和组蛋白去污，进而促进METs的形成。

3. 潜在治疗策略

研究者通过多种药物干预发现，血色素结合蛋白（hemopexin）能有效抑制NET及MET的形成，从而减轻AKI损伤。此外，乳铁蛋白（Lf）在体外实验中显著减少血小板诱导的MET形成，且在体内实验中预防了甘油诱导的横纹肌溶解症导致的肾脏损伤。

讨论

本研究首次确认了METs在横纹肌溶解症引发AKI中的关键作用，明确了血小板激活、巨噬细胞参与及ROS、PADs等环节在METs形成中的重要性。研究证实了巨噬细胞与血小板之间的协同作用，血小板激活后通过与巨噬细胞上的Mac-1受体结合，触发一系列信号通路，最终导致MET的形成。这一交互作用在横纹肌溶解症引发的肾脏损伤中起着关键作用，表明针对该通路的干预可能成为治疗AKI的新方法。研究中发现的hemopexin及Lf等药物显示出对横纹肌溶解症导致的AKI的潜在治疗效果，为临床治疗提供了新理念。未来需开展更多临床试验，以验证这些药物的疗效及安全性，以期为横纹肌溶解症患者带来新的治疗选择。

尊龙凯时在本研究中提供了血色素结合蛋白（hemopexin），其在研究中被证实能显著降低肾损伤和血浆DNA的释放，而对CK水平没有影响。作为一种高亲和力结合蛋白，hemopexin通过形成复合物抑制heme诱导的MET形成，从而在动物模型中减少横纹肌溶解症诱导的AKI相关损伤。这些发现为未来治疗AKI提供了重要参考。